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免疫组化实验

免疫组化试验

免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 免疫组化技术近年来得到迅速发展。50年代还仅限于免疫荧光技术,50年代以后逐渐发展建立起高度敏感,且更为实用的免疫酶技术。

免疫组织化学是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。

1. 免疫组化实验流程:

A.免疫组化石蜡片操作过程:

1.取材固定:取新鲜组织,洗去血渍,剔除结缔组织后4%多聚甲醛固定,时间视组织大小及厚度而定。

2. 切片及烤片:使用APES或多聚赖氨酸处理的防脱玻片捞取切片。捞片后立即置烤箱37 ℃5-6小时以使切片紧密粘附。

3. 组织切片常规脱蜡至水:依次80%,90%,100%二甲苯及乙醇各5-7分钟,然后水洗。

4. 灭活:将切片置于3%H2O2,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。

5. 热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0)或0.02M PBS(PH7.2-7.6),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。自然冷却至室温。 酶修复抗原:消化酶处理组织,时间视消化酶浓度而定。

6. 滴加5%BSA封闭液, 37℃30分钟。甩去多余液体, 不洗。

7.滴加稀释的一抗, 4℃过夜或37℃2小时。PBS(pH7.2-7.6)洗5分钟×3次。

8.滴加相应的二抗, 37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗5分钟×3次。

9.滴加SABC,37℃ 30分钟。PBS(pH7.2-7.6)洗5分钟×4次。

10.DAB显色:使用DAB显色试剂盒。取1ml蒸馏水,加试剂盒中A,B,C试剂各1滴,混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间,一般在15分钟之间。蒸馏水洗涤。

11.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

B.血涂片,细胞和冰冻片操作过程:

1. 载玻片防脱片剂处理;

2. 抗凝血经分层离心后涂片;培养细胞也可涂片或贴片生长;冰冻片室温风扇吹干。

3. 固定方案首选4%多聚甲醛或10%福尔马林固定30min;对不能耐受甲醛固定的抗原,纯丙酮室温固定30min。蒸馏水洗。(干燥后可冰冻保存);

4. 30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温30分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。

5.抗原修复:细胞片的抗原修复建议使用酶修复,冰冻片酶修复或热修复均可。

其余步骤和石蜡切片相同。

2.免疫组化实验收费明细:


1、 所有实验均实事求是的做,保证结果的客观真实性。

2、 实验周期为2周左右。

3、 如果加急的实验,根据公司的实验安排,跟公司商量后,给客户一个大概的实验周期。


更多内容请咨询热线:021-64225729

E-mail:InTech@intechnology.cn

在线QQ技术支持:2869089062

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