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Real Time PCR

Real Time PCR实验

 

实时荧光定量PCR(Real Time PCR)技术,是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR的荧光检出方法包括SYBR green(荧光染料掺入法)和Taqman probe (探针法)两种方法。

 

一、 InTech  mRNA 检测技术服务标准流程:

 

1、 客户提供样本(组织,细胞或者RNA),请参照取样与保存;

2、 客户提供检测指标及种属;

3、与客户协商内参的选取(人,大鼠,小鼠均有两种内参可以采用);

4、客户样本验证进行抽提,特异性逆转录,QPCR 检测,验证系统是否好用;

5、 客户的大批量样本进行处理,抽提和实验;

6、数据处理。

 

二、 InTech mRNA 检测技术使用仪器:(ABI Vii 7

 

 

三、InTech mRNA检测建议样本搜集保存方法:

 

原则:足量的并且保证纯度的细胞或组织

 

Real-time PCR 的组织取样与保存:       

     A.取动物的组织,动作要求迅速,尽量避免样本在环境中暴露太久;     

     B.将样本立即放入无菌无酶的冻存管中,为保证质量,推荐选取Axygen,corning,nunc等国外品牌的        冻存管;       

     C.在冻存管上做好标记,尽量清晰易辨;在实验记录本上做好记录,尽量详细易查;      

     D.将冻存管直接放入液氮中速冻;或加入1mL  Trizol到冻存管中,再放入液氮速冻;      

     E.速冻2h后,将冻存管从液氮转至-80℃冰箱,可以保存6个月左右。 

 

Real-time PCR的细胞取样与保存:

A.悬浮细胞:500g-1离心5min取细胞,用PBS清洗2-3遍,得细胞,并转至放入冻存管中;

B.贴壁细胞:胰酶消化后,用PBS清洗2-3遍,500g-1离心5min得细胞,并转至放入冻存管中;

C.加入1mL Trizol到冻存管中,吹打混匀;

D.在冻存管上做好标记,尽量清晰易辨;在实验记录本上做好记录,尽量详细易查;

E.将冻存管放入液氮速冻,2h后,转至-80℃冰箱,可以保存6个月左右。

注:1)尽量及早提取组织或细胞样本中的RNA并逆转录为cDNA,因为即使冻存,降解仍然存在;2)样本运输:液氮运输或者干冰运输

 

【您只需提供】

Ø  组织

Ø  或高浓度的Total RNA

Ø  或样品的cDNA

Ø  基因序列、来源等背景资料

 

【我们向您提供】 

Ø  实验材料、仪器、方法、步骤

Ø  供发表的引物序列、扩增曲线、熔解曲线

Ø  原始实验数据和计算好的正式实验数据

Ø  免费实验技术支持

 

  更多内容请咨询热线:021-64225729

E-mail:InTech@intechnology.cn

在线QQ技术支持:2869089062

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