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蛋白芯片实验


一 什么是蛋白质芯片?

蛋白质芯片是一种高通量的蛋白质免疫检测分析技术,可以简单的理解为多重ELISA检测技术。但是不同于ELISA的是,它一次试验可以检测几百种目标因子,且只需10-100ul的样品。抗体芯片是蛋白质芯片中的主要类型,抗体芯片是将多种不同的捕获抗体印制在固相支持物上,每种抗体孤立成点,抗体之间不相互影响,呈方阵排列。抗体固定在固相支持物上以后,用封闭液进行封闭空余位点,然后将生物样品和芯片一起孵育,样品中特异性的抗原与捕获抗体偶联,偶联到捕获抗体上的抗原再与生物素标记的检测抗体一起孵育,最后通过荧光剂-链霉亲和素或者HRP-链霉亲和素和化学发光试剂进行荧光染色剂检测或者化学发光信号检测,得到芯片结果图片,通过软件提取图片荧光值或灰度值,得到芯片数据,根据数据来比较目标因子信号差异和定量检测目标因子含量。

二、蛋白质芯片有什么优点?

A.样品处理简单:可以直接用粗生物样品(血清、 血浆、尿、体液等)进行分析,只需经过离心处理即可;

B.样品用量少:可以低至10μl-100μl样品检测;

C.高通量:一个样品一次试验可以检测多种因子(高达 成 百 上 千 种), 同 时 快 速 的 发 现 多 个 生 物 标 记 物,且几天可以完成上千个样品的检测;

D.特异性和灵敏度高:单克隆抗体芯片特异性高,可鉴定未知抗原/蛋白质,以减少测定蛋白质序列的工作量,且蛋白芯片的灵敏度高可以发现低丰度蛋白质及生物标志物;

E.可 以 测 定 疏 水 蛋 白 质:与 “ 双 相 电 泳 加 质 谱 ” 相 比,除了有相似功能外,并可增加测定疏水蛋白质的表达和功能;

F.集成性:在同一系统中集发现和检测为一体;

G.可定量检测:结合至芯片上的抗体通过标准曲线来对测定抗原进行定量,但一般飞行质谱不用于定量分析;

H.替代和互补传统检测方法: 利用抗体芯片, 可替代 Western Blot;利 用 定 量 抗 体 芯 片 , 可 替 代ELISA定量检测;抗体芯片可以互补流式细胞仪不足的功能,如将细胞溶解,可测定细胞内的抗原, 而且灵敏度远高于流式细胞仪;

G.性 价 比 高:利 用 定 量 芯 片 一 次 性 检 测 大 量 目 标 因子,平均定量每个因子所需的价钱远比ELISA便宜。


三、蛋白质芯片都有哪些分类?

根据应用:蛋白功能芯片和蛋白表达芯片

根据原理:夹心法芯片、标记法芯片、竞争法芯片

根据载体:玻片芯片、膜芯片、96孔板芯片

根据性能:定量芯片和半定量芯片

根据载体上捕获剂:抗体芯片、抗原(蛋白)芯片、小分子(反相)芯片、拟肽芯片

根据种属:人类抗体芯片、小鼠抗体芯片、大鼠抗体芯片、猪抗体芯片、猴抗体芯片

根据检测目标:

Ø 细胞因子(Cytokine)抗体芯片

Ø 凋亡因子(Apoptosis)抗体芯片 Ÿ

Ø 肥胖因子(Adipokine)抗体芯片

Ø 血管生成因子(Angiogenesis)抗体芯片 Ÿ

Ø 炎症因子(Inflammation)抗体芯片 Ÿ

Ø 动脉粥样硬化抗体芯片(Atherosclerosis)

Ø 趋化因子(Chemokine)

Ø 生长因子(Growth factor)抗体芯片 Ÿ

Ø 基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase)抗体芯片 Ÿ

Ø 白介素(Interleukin)抗体芯片

Ø 磷酸化(Phosphorylation)抗体芯片 Ÿ

Ø 急性肾损伤(Acute Kidney Injury)抗体芯片


四、蛋白质芯片的应用有哪些方面?


蛋 白 质 芯 片 能 够 用 于 研 究 蛋 白 质-蛋 白 质 、DNA-蛋白质、RNA-蛋白质、 蛋白-小分子之间的相互作用,蛋白修饰作用、 抗体特异性鉴定、筛选药物作用的蛋白靶点, 检测蛋白表达水平和抗体(自身抗体)水平,筛选肿瘤等疾病中的生物标志物等广泛领域。


在药物开发过程中的应用:鉴定潜在的靶标分子、研究药物作用、个性化药物治疗、细胞活动分子机制研究等;

在癌症研究中的应用:诊断、癌症发展的分子机制、临床前研究、抗肿瘤药物的效应、临床应用研究等;

在肿瘤诊断中的应用:用于肿瘤患者的辅助诊断、疗效判断、病情检测、预后评估及判断肿瘤有无复发和转移等,用于肿瘤高危人群的定期筛查,用于肿瘤分子流行病学调查及肿瘤生物学研究等;

抗体筛查的应用:一次性对噬菌体抗体库上万个不同的抗体克隆进行检测;

其他方面的的应用:毒理学、环境检测、食品卫生安全的监测等。


五、蛋白质芯片的原理是什么?


双抗体夹心法,

样品标记法。


六、蛋白质芯片适合什么样品检测,该如何收集样品?


适用于蛋白质芯片的常见样品 :

血清、血浆、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液;除了这些常见的样品,全世界客户使用RayBiotech抗体芯片产品检测成功的特殊样品还有尿液、眼泪、唾液、痰、脑脊液、前列腺液、腹腔液、中耳液、血小板释放物、骨头裂解液等。注射液、奶水、初乳、支气管肺泡灌洗液、脓肿液、中耳液、血小板释放物、骨头裂解液等。


七、蛋白质芯片的实物图:


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